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    細胞增殖檢測新技術——EdU
    來源:本站  發布日期:2015/12/17  點擊次數:552

    直接測定DNA合成是細胞增殖檢測的最準確方法之一,是測定物質毒性、評估藥物安全評價、細胞健康的基本方法,其中以前常用的方式是利用胸腺嘧啶核苷酸類似物——BrdU進行檢測。因為在細胞周期的S期,和細胞一起孵育的BrdU能滲入DNA分子中,再結合BrdU抗體與滲入DNA的BrdU特異性結合,就能夠檢測到DNA復制活躍的細胞。 
    但BrdU有一大缺點,就是需要變性DNA后才能與抗體結合,但這就破壞了DNA雙鏈結構,影響了其他染料的結合染色,導致染色彌散,準確性降低等問題。哈佛大學醫學院細胞生物學家Adrian Salic就認為:“為了能夠暴露BrdU的抗原表位,必須用高濃度的鹽酸,乙酸或酶解,但經歷了如此嚴重的處理后,細胞原本精巧細致的結構在顯微鏡下就變得慘不忍睹了! 
    事實上,現在有一種新的檢測方法能避免這種情況的發生——EdU檢測。EdU (5-乙炔基-2’脫氧尿嘧啶核苷)也是一種胸腺嘧啶核苷類似物,但其連有的炔羥基團在天然化合物中很少見,在細胞增殖時能夠插入正在復制的DNA分子中,基于EdU與染料的共軛反應可以進行高效快速的細胞增殖檢測分析,可以有效地檢測處于S期的細胞百分數。與傳統的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法相比,更簡單,更快速,更準確。EdU只有BrdU抗體大小的1/500,在細胞內更容易擴散,不需要嚴格的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理,有效地避免了樣品損傷,有助于在組織、器官的整體水平上觀測細胞增殖的真實情況,具有更高的靈敏度和更快的檢測速度。Adrian Salic特別強調:“與傳統的免疫熒光染色不同,EdU反應能在幾分鐘內完成,且不需要進行嚴格的樣品變性處理,使得組織成像更簡單易行!奔毎鲋硻z測方法基于EdU與Apollo?熒光染料的完美結合準確檢測新合成的DNA,簡單,快速,準確。這種檢測方法非?焖,且只需簡單的幾個步驟,因此也適用于高通量篩選試驗,如在藥物篩選中檢測加藥后細胞的活力。  
    BrdU 需要DNA 變性后才能與抗體結合,導致BrdU、Hoechst 染色彌散,邊緣模糊不清; 
    而EdU 邊緣清晰完整,檢測更靈敏、更準確EdU可以檢測新合成的DNA,而EU則可以檢測新合成的RNA。EU是一種尿嘧啶核苷類似物,能夠在RNA轉錄時期代替尿嘧啶( U )滲入正在合成的RNA分子,基于EU與Apollo?熒光染料的特異性反應進行RNA檢測。EU能夠在體內和體外水平檢測時間和空間上RNA合成的變化,能夠更方便地研究RNA轉錄位點,結合相關抗體標記能夠檢測與RNA有相互作用的蛋白。結合EdU和EU進行檢測新合成的DNA和新合成的RNA,可以深入開展細胞增殖、細胞周期、細胞毒性、DNA復制及修復、信號通路等方面的研究。

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